两个男孩子能生孩子吗，昆明纳瑞丨细胞计数与存活的测试实验方法

2022-12-19 20:43

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细胞冷冻复苏是细胞培养的常规工作，可以解决连续传代培养导致的细胞变性或转化。细胞的原代培养和传代培养以及细胞冷冻保存和复苏后都需要进行细胞计数。那么细胞计数和存活的检测方法有哪些呢？

1.原则：

(1)计算

细胞的数量可以用血细胞计数器或Coultercounter颗粒计数器自动计数。

(2)血细胞计数板上一般有两个小室，每个小室精细刻有9个1mm2的正方形，四个角的正方形精细刻有16个小正方形，深度均为0.1mm。当小室顶部盖上盖玻片时，每个大正方形的体积为1mm2 0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，统计每个大方块中的细胞数，乘以稀释倍数，再乘以104，就是每毫升的细胞数。

(3)存活试验的步骤是dyeexclusion，用染料渗入死细胞，而活细胞不会被染色，因为细胞膜完好无损，染料无法渗透。一般使用蓝色的台盼蓝染料，如果台盼蓝不易被细胞吸收，则使用红色的赤藓红蓝。计算细胞活力：活细胞数/(活细胞数和死细胞数)100%。计数应在台盼蓝染色后几分钟内完成。随着时间的推移，一些活细胞开始吸收染料。由于台盼蓝对蛋白质有很强的亲和力，使用无血清稀释液可以使染色计数更准确。

2.材料：

0.4%重量/体积的台盼蓝(gibco br 15250-061)；红色素蓝染剂；将0.1克带蓝色的赤藓红(sigmae-9259)和0.05克保守的对羟基苯甲酸甲酯(sigmah-3647)溶解在100毫升ca/毫克游离盐水中；血细胞计数盘和盖玻片；一个柜台；低倍倒置显微镜；粒子计数器(库尔特计数器，库尔特电子公司)。白细胞稀释液(4%醋酸溶液)。

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3.步骤：

(1)取50 l细胞悬液和50l台盼蓝(orerythrosinblue)在1.5ml小离心管中混合均匀。

(2)取少许混合物(约15l)从血细胞计数板小室上方的凹槽中加入，盖上盖玻片，在100倍倒置显微镜下观察。活细胞不染色，死细胞呈蓝色(或红色——赤藓红蓝)。

(3)数四个大方块中的细胞总数，除以4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因为是和台盼蓝等体积混合的)，最后乘以104，就是每毫升细胞悬液中的细胞数。如果单元格在行上，则只计算上行和右行的单元格(或下行和左行的单元格)。

注：4个大细胞的细胞总数稀释倍数 104/4=细胞数/ml；当每个细胞的体积为0.1 cm 0.1 cm 0.01 cm=10-4 ml时，最佳浓度为5 ~ 10 105个细胞/ml，在此范围外计数误差过大。可取出高浓度细胞悬液进行稀释或连续稀释，然后计数。

5.示例：

将T75单层培养制成10ml细胞悬液，将0.1ml溶液和0.1ml台盼蓝在试管中混合均匀。将少许混合溶液加入血细胞计数板，并计数四个方块中的细胞数。

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09年底开始做试管，移植了3次都失败了。我当时就想要龙宝，没想到一直到现在都怀上了。现在在调养，准备再推广出院。

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